SAP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402165-ACT

APCS codifica o componente P do amiloide sérico (SAP), uma glicoproteína da família das pentraxinas que se liga, de forma dependente de cálcio, a polissacarídeos microbianos, detritos nucleares e fibrilas amiloides, influenciando a opsonização e processos da imunidade inata relacionados ao complemento. O SAP participa em vias de reconhecimento de padrões e de depuração ao interagir com recetores Fc e componentes do complemento, modulando a sinalização inflamatória e a homeostase tecidular. Alterações na abundância do SAP ou na sua atividade de ligação têm sido associadas à biologia da deposição de amiloide e a estados inflamatórios desregulados, tornando o APCS um alvo útil para estudar complexos proteicos associados à matriz extracelular e mecanismos de vigilância imunitária. Em sistemas humanos, o SAP também é utilizado como leitura molecular da modulação, mediada por pentraxinas, da ligação a ligandos solúveis e do processamento de proteínas propensas à agregação.

SAP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de APCS sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SAP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus APCS em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição APCS, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SAP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus APCS nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SAP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SAP em células tumorais com expressão de APCS silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.