SAP 155 Plasmide Double Nickase (h): sc-402925-NIC

SF3B1 codifica SAP 155, un componente centrale essenziale del sottocomplesso SF3b all’interno della snRNP U2, che contribuisce a definire il punto di ramificazione (branch point) e il sito di splicing 3′ durante lo splicing del pre-mRNA. Attraverso il suo ruolo nell’assemblaggio dello spliceosoma e nella scelta dei siti di splicing, SAP 155 influenza la diversità delle isoforme trascrizionali e collega l’elaborazione dell’RNA al controllo del ciclo cellulare, alle risposte al danno al DNA e alla proteostasi. La disregolazione dello splicing dipendente da SF3B1 è stata associata a un’ampia presenza di utilizzo aberrante degli esoni e a programmi di espressione genica alterati in numerosi tumori e neoplasie ematologiche, oltre che in altri disturbi in cui la fedeltà dello spliceosoma risulta compromessa. Di conseguenza, SF3B1/SAP 155 è spesso studiato per collegare le alterazioni dei fattori di splicing ai cambiamenti a valle nelle vie di segnalazione e nelle firme di splicing rilevate tramite RNA-seq.

SAP 155 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SF3B1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SF3B1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SF3B1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SF3B1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.