Plásmido CRISPR de Activación (h) SAP 155: sc-402925-ACT

SF3B1 codifica SAP 155, un componente central del subcomplejo SF3b dentro de la snRNP U2, necesaria para el reconocimiento del punto de ramificación y la eliminación precisa de intrones durante el empalme (splicing) del pre-ARNm. Al ayudar a ensamblar y estabilizar el espliceosoma en el sitio de empalme 3′, SAP 155 influye en programas de empalme alternativo que moldean la diversidad del proteoma y coordinan el procesamiento del ARN con la regulación transcripcional. La alteración de la selección de sitios de empalme dependiente de SF3B1 perturba la maduración del ARN y puede modificar la expresión de vías que controlan la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la diferenciación. SF3B1 se estudia con frecuencia en el contexto de la biología del espliceosoma y del empalme erróneo asociado a enfermedad, donde variantes recurrentes en la región codificante se vinculan con un empalme aberrante generalizado y una reprogramación del transcriptoma.

SAP 155 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SF3B1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SAP 155 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SF3B1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SF3B1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SAP 155. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SF3B1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SAP 155 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SAP 155 en células tumorales con expresión de SF3B1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.