Plasmide CRISPR/Cas9 KO RUNX3 (m): sc-419487

Présentation

Runx3 code le facteur de transcription RUNX3, une protéine de liaison à l’ADN contenant un domaine Runt, qui s’associe à CBFB pour réguler la spécification des lignages et les programmes de différenciation dans de nombreux tissus. Dans les systèmes immunitaire et épithélial de la souris, RUNX3 intègre des signaux issus de voies telles que TGF-β/SMAD et de réseaux transcriptionnels du développement afin de contrôler les décisions de destinée cellulaire, la maturation et une régulation de la croissance dépendante du contexte. Une activité altérée de Runx3 a été associée à des programmes transcriptionnels dérégulés impliqués dans l’inflammation, la tumorigenèse et des phénotypes neurodéveloppementaux chez des organismes modèles. En tant que nœud de la régulation des promoteurs et des enhancers, RUNX3 est fréquemment étudié pour son impact sur l’expression génique dépendante de la chromatine et le remodelage des voies en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RUNX3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Runx3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Runx3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Runx3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RUNX3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Runx3 pour l'étude de la signalisation de RUNX3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Runx3 essentiels à la fonction de RUNX3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Runx3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RUNX3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le RUNX3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Runx3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RUNX3 plasmide HDR (m) et le RUNX3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Runx3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Runx3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.