RPE65 CRISPR 활성화 플라스미드(h): sc-401489-ACT
- Target species: human
- 20 µg of transfection-ready, purified plasmid DNA; Suitable for up to 20 transfections
- RPE65 CRISPR Activation Plasmid (h) 는 synergistic activation mediator (SAM) transcription activation system으로 특정유전자 발현을 upregulate하도록 디자인되였습니다.
- RPE65 CRISPR 활성화 플라스미드(h)는 1:1:1의 질량 비율로 3개의 플라스미드로 구성되어 있습니다: 비활성화된 Cas9(dCas9) 뉴클레아제(D10A 및 N863A)를 트랜스활성화 도메인 VP64에 융합한 플라스미드와 블라스티시딘 저항 유전자; MS2-p65-HSF1 융합 단백질을 코딩하는 플라스미드와 하이그로마이신 저항 유전자; 표적 특이적인 20nt 가이드 RNA가 두 개의 MS2 RNA 아파테머에 융합되어 있고, 푸로마이신 내성 유전자
- The resulting SAM complex binds to a site-specific region approximately 200-250 nt upstream of the transcriptional start site and provides robust recruitment of transcription factors for highly efficient gene activation
- RPE65 CRISPR 활성화 플라스미드 (h) 및 RPE65 CRISPR 활성화 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 RPE65 전사 개시점 상류의 서로 다른 조절 영역을 표적으로 합니다. 하나 또는 두 가지 디자인 모두 사용할 수 있습니다
- Transfection, gene knockout효율은 WB, IF나 IHC등 방법으로 측정할수있습니다, 권장하는 항체는 RPE65 Antibody (E-5): sc-390787
주문정보
| 제품명 | 카탈로그 번호 | 단위 | 가격 | 수량 | 관심품목 | |
RPE65 CRISPR 활성화 플라스미드(h) | sc-401489-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
RPE65 CRISPR 활성화 플라스미드(h2) | sc-401489-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
RPE65는 망막색소상피(RPE)에서 시각 주기에 필수적인 레티노이드 이성질화-가수분해효소(retinoid isomerohydrolase)를 암호화하며, 올-트랜스 레티닐 에스터(all-trans-retinyl esters)를 11-시스 레티놀(11-cis-retinol)로 전환하는 반응을 촉매하여 로돕신 재생이 지속되도록 돕습니다. 이러한 활성은 발색단(chromophore)의 가용성을 유지함으로써 광변환(phototransduction)을 지지하고, 외망막에서 레티놀 수송, 에스터화, 산화 스트레스 반응을 포함한 세포 과정과 레티노이드 대사를 연결합니다. RPE65의 발현 또는 기능 변화는 발색단 재활용 장애와 광수용체 기능 이상과 연관되며, 따라서 망막 항상성을 연구하는 데 핵심적인 노드로 간주됩니다. RPE65 조절을 활용한 in vitro 모델은 시각 주기의 전사 조절과 망막 변성 표현형과 관련된 하위 신호 변화들을 규명하는 데 사용됩니다.
RPE65 CRISPR 활성화 플라스미드(h)는 기본 DNA 서열을 변경하지 않고 내인성 RPE65 발현을 상향 조절하는 표적화된 비파괴적 접근법을 제공합니다.
RPE65 CRISPR 활성화 플라스미드(h)는 인간 세포주에서 RPE65 유전자좌의 고효율, 위치 특이적 전사 상향 조절을 위해 설계된 3개의 플라스미드로 구성된 시너지 활성화 매개체(SAM) 시스템입니다. 이 시스템은 DNA 결합 능력은 유지하면서 뉴클레아제 활성을 제거하는 두 가지 비활성화 돌연변이(D10A 및 N863A)를 지닌 촉매 활성 없는 Cas9(dCas9)을 중심으로 구축되었습니다. 이 dCas9은 강력한 전사 활성화제인 VP64와 융합되어 있으며, 선별을 위해 블라스티시딘 내성 유전자와 함께 발현됩니다. 두 번째 플라스미드는 dCas9-VP64와 협동하여 작용하는 2차 활성화 복합체인 MS2-p65-HSF1 융합 단백질을 암호화하며, 히그로마이신 내성 유전자와 함께 존재한다. 세 번째 플라스미드는 표적 특이적 20nt sgRNA를 암호화하며, 이는 MS2-p65-HSF1 복합체를 활성화 부위로 유인하는 두 개의 MS2 RNA 아파타머와 융합되어 있으며, 푸로마이신 내성 유전자가 함께 포함되어 있습니다. 세 플라스미드는 모든 시스템 구성 요소의 균형 잡힌 발현을 위해 질량비 1:1:1로 전달됩니다.
표적 부위에 조립되면 SAM 복합체는 RPE65 전사 시작점의 상류 약 200bp 지점에 결합하며, 이곳에서 VP64, p65 및 HSF1이 협력하여 전사 기구를 모집하고 내인성 RPE65 발현의 상향 조절을 유도합니다. 핵산분해 활성을 가진 Cas9과 달리, dCas9은 이중 가닥 절단을 유발하거나 게놈 서열을 변형시키지 않아, 원형 RPE65 위치를 보존하고 내인성 위치에서 RPE65 의존적 전사 반응을 연구할 수 있게 하여, 기능 연구, 표적 유전자 식별 및 RPE65 발현이 침묵되거나 감소된 종양 세포에서 RPE65 경로 복원을 모델링하는 데 유용한 도구입니다.
연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.