Particules Lentivirales d'Activation (h) RoXaN: sc-411701-LAC

Le gène humain ZC3H7B code la protéine à doigt de zinc RoXaN, un facteur associé à l’ARN impliqué dans la régulation post‑transcriptionnelle de l’expression génique via la liaison à l’ARN et l’interaction avec des composants de complexes ribonucléoprotéiques. RoXaN a été associé au contrôle du métabolisme des ARNm, notamment à des effets sur la stabilité des transcrits et la traduction, susceptibles d’influencer les programmes d’état cellulaire. Par ces fonctions de régulation de l’ARN, ZC3H7B est pertinent pour l’étude des interactions hôte–virus et des processus de réponse au stress cellulaire, où le remodelage du devenir des ARN est un déterminant clé du phénotype. Une régulation altérée des réseaux de traitement de l’ARN impliquant RoXaN a été évoquée dans le contexte de programmes d’expression génique pertinents en cancérologie ainsi que d’autres maladies associées à une homéostasie de l’ARN perturbée.

Les particules d'activation lentivirales RoXaN (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ZC3H7B dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales RoXaN (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ZC3H7B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de RoXaN. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ZC3H7B ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.