ROS-GC1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-404483-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- ROS-GC1O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase ROS-GC1 (h) e o Plasmídeo Double Nickase ROS-GC1 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para GUCY2D. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:ROS-GC1 Anticorpo (B-7): sc-376217
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
ROS-GC1 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-404483-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ROS-GC1 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-404483-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O GUCY2D humano codifica a guanilato ciclase 1 do segmento externo da retina (ROS-GC1), uma enzima associada à membrana que converte GTP em cGMP para sustentar a sinalização por nucleotídeos cíclicos em células fotorreceptoras. A ROS-GC1 atua a jusante da fototransdução, integrando um feedback dependente de Ca²⁺ por meio de proteínas ativadoras de guanilato ciclase para restaurar os níveis de cGMP e regular a atividade dos canais regulados por cGMP. Essa via mantém a homeostase do segmento externo e a sinalização sináptica ao acoplar alterações de Ca²⁺ intracelular induzidas pela luz ao turnover de nucleotídeos cíclicos. Alterações genéticas em GUCY2D estão fortemente associadas a fenótipos de degeneração retiniana hereditária, tornando o gene um nó-chave para estudar o metabolismo de cGMP, a fidelidade da sinalização sensorial e mecanismos de sobrevivência de fotorreceptores.
ROS-GC1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus GUCY2D em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de GUCY2D. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função GUCY2D. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com GUCY2D interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.