Plasmide Double Nickase (h) RNF213: sc-418450-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) RNF213 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide RNF213 Double Nickase (h) et le plasmide RNF213 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant RNF213. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: RNF213 Antibody (5C12): sc-293391
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) RNF213 | sc-418450-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) RNF213 | sc-418450-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF213 code une grande ubiquitine ligase E3 contenant un domaine RING finger, ainsi qu’une ATPase AAA+, qui contribue à la régulation, dépendante de l’ubiquitine, du renouvellement des protéines et des voies de signalisation répondant au stress. RNF213 a été impliqué dans des voies coordonnant l’homéostasie endothéliale et vasculaire, la signalisation inflammatoire et les réponses cellulaires à l’hypoxie et au stress métabolique, en accord avec des rôles dans le remodelage angiogénique. Les variations génétiques et l’altération de la fonction de RNF213 sont fortement associées à la maladie de Moyamoya et à d’autres phénotypes cérébrovasculaires et vasculopathiques, ce qui motive des études mécanistiques dans des modèles cellulaires humains pertinents. De plus, l’activité de RNF213 a été reliée à la modulation de voies de l’immunité innée, ce qui en fait un nœud utile pour analyser les interactions entre ubiquitination, inflammation et biologie vasculaire.
RNF213 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RNF213 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RNF213. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RNF213. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RNF213.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.