Plasmide Double Nickase (h) RMP: sc-406916-NIC

L’URI1 humain code l’interacteur 1 non conventionnel de la préfodline avec RPB5 (RMP), un facteur multifonctionnel qui s’associe à l’ARN polymérase II via RPB5 et contribue au contrôle transcriptionnel, à la protéostasie et aux réponses cellulaires au stress. RMP participe à des réseaux de régulation qui influencent la croissance cellulaire et les voies de survie, notamment par la modulation de la signalisation des récepteurs nucléaires et des réponses aux stress génotoxiques ou métaboliques. Une activité URI1/RMP altérée a été rapportée dans des contextes de prolifération dérégulée et de signalisation oncogénique, ce qui en fait un nœud utile pour étudier le couplage transcription–métabolisme. L’exploration expérimentale d’URI1 soutient la recherche sur le remaniement des voies, la dynamique des complexes protéiques et les mécanismes qui maintiennent des états cellulaires aberrants.

RMP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus URI1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de URI1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de URI1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de URI1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.