RIP Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400377-ACT

O RIPK1 humano (RIP) codifica uma quinase de serina/treonina que atua como regulador central da sinalização do receptor de TNF e de receptores de reconhecimento de padrões, integrando sinais que determinam a transcrição inflamatória, a apoptose ou a necroptose. Por meio de funções de andaime (scaffolding) e catalíticas, o RIPK1 coordena a montagem de complexos proximais ao receptor e interage com as vias de sinalização de NF-κB e MAPK, bem como com a execução necroptótica mediada por RIPK3–MLKL. Sua atividade influencia a produção de citocinas, as respostas celulares ao estresse e a homeostase da imunidade inata, tornando-o um alvo frequentemente estudado em inflamação e desregulação imune. A sinalização desregulada de RIPK1 tem sido implicada em contextos como doença inflamatória crônica, neuroinflamação e sinalização associada a tumores, sustentando estudos mecanísticos sobre morte celular e vias inflamatórias.

RIP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RIPK1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RIP O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RIPK1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RIPK1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RIP. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RIPK1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RIP no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RIP em células tumorais com expressão de RIPK1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.