Ribosomal Protein L11 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401955-ACT

RPL11 codifica la proteina ribosomiale L11, un componente fondamentale della grande subunità ribosomiale 60S, che supporta la biogenesi dei ribosomi e un’efficiente elongazione della traduzione. Oltre al suo ruolo strutturale, RPL11 partecipa alla segnalazione dello stress nucleolare modulando l’asse MDM2–TP53, collegando le alterazioni nell’assemblaggio dei ribosomi al controllo del ciclo cellulare e all’apoptosi dipendenti da p53. Alterazioni del dosaggio o della funzione di RPL11 sono associate a fenotipi da ribosomopatia e a vie rilevanti per il cancro attraverso effetti su proteostasi, regolazione della crescita e sorveglianza dei checkpoint. Di conseguenza, RPL11 è spesso studiato in contesti quali l’integrità del nucleolo, il controllo della traduzione e le reti di soppressori tumorali responsivi allo stress.

Ribosomal Protein L11 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RPL11 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Ribosomal Protein L11 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RPL11 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RPL11, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Ribosomal Protein L11. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RPL11 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Ribosomal Protein L11 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Ribosomal Protein L11 nelle cellule tumorali con espressione di RPL11 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.