Rho T1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401601

Panoramica

RHOT1 codifica Rho T1 (Miro1), un’atipica GTPasi della famiglia Rho ancorata alla membrana mitocondriale esterna, che collega i mitocondri al trasporto basato sui microtubuli tramite interazioni con gli adattatori TRAK e con i motori chinesina/dineina. Integrando l’attività GTPasica con il rilevamento del calcio mediato da domini EF-hand, Rho T1 coordina il traffico, il posizionamento e il turnover dei mitocondri, influenzando la polarizzazione neuronale, la funzione sinaptica e la distribuzione dell’energia. RHOT1 contribuisce inoltre al controllo di qualità mitocondriale attraverso un crosstalk con le vie di mitofagia dipendenti da PINK1/Parkin e la regolazione della dinamica degli organelli nei siti di contatto tra RE e mitocondri. La disregolazione del trasporto e della mitofagia dipendenti da RHOT1 è stata collegata alle risposte cellulari allo stress ed è frequentemente studiata nel contesto della neurodegenerazione e di altri disturbi caratterizzati da disfunzione mitocondriale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Rho T1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RHOT1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RHOT1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RHOT1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Rho T1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RHOT1 per lo studio della segnalazione di Rho T1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RHOT1 critici per la funzione di Rho T1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RHOT1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Rho T1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Rho T1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RHOT1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Rho T1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Rho T1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RHOT1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RHOT1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.