Rho T1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401601

Visão geral

RHOT1 codifica a Rho T1 (Miro1), uma GTPase atípica da família Rho ancorada à membrana externa mitocondrial, que acopla as mitocôndrias ao transporte baseado em microtúbulos por meio de interações com adaptadores TRAK e com os motores cinesina/dineína. Ao integrar a atividade de GTPase com a detecção de cálcio mediada por domínios EF-hand, a Rho T1 coordena o tráfego, o posicionamento e a renovação das mitocôndrias, influenciando a polarização neuronal, a função sináptica e a distribuição de energia. RHOT1 também contribui para o controle de qualidade mitocondrial por meio de comunicação cruzada com vias de mitofagia dependentes de PINK1/Parkin e da regulação da dinâmica de organelas em sítios de contato RE–mitocôndria. A desregulação do transporte e da mitofagia dependentes de RHOT1 tem sido associada a respostas ao estresse celular e é frequentemente estudada no contexto de neurodegeneração e outros distúrbios caracterizados por disfunção mitocondrial.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Rho T1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene RHOT1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do RHOT1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do RHOT1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Rho T1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de RHOT1 para a investigação da sinalização de Rho T1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) RHOT1 críticos para a função Rho T1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos RHOT1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Rho T1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Rho T1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus RHOT1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Rho T1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Rho T1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia RHOT1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo RHOT1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.