RHAMM CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420881

概要

Hmmr は、微小管およびヒアルロン酸と相互作用するタンパク質である RHAMM（receptor for hyaluronan-mediated motility：ヒアルロン酸介在性運動の受容体）をコードしており、細胞骨格の構築、中心体機能、有糸分裂紡錘体の組み立てを統合的に制御します。RHAMM は、細胞外マトリックスからのシグナルを細胞内の微小管動態や、運動性および細胞周期進行に関連するシグナル伝達経路と結び付けることで、細胞移動と増殖に寄与します。マウス系では、RHAMM 活性の変化が、有糸分裂の破綻、ゲノム不安定性、ならびにがん生物学や炎症性微小環境に関わる異常な組織リモデリング過程と関連することが示されています。これらの特徴により、Hmmr は、ヒアルロン酸シグナルが紡錘体制御や細胞運動プログラムとどのように接続するかを解明するための有用な標的となります。

RHAMM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるHmmr遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Hmmr内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Hmmrのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RHAMMタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RHAMMシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Hmmr欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RHAMMの機能に不可欠なHmmrエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Hmmrゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RHAMM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびRHAMM CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Hmmr遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RHAMM HDRプラスミド（m）および RHAMM HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHmmrホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHmmr標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。