REPS1 Double Nickase Plasmid (h): sc-409347-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das REPS1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- REPS1 Double-Nickase-Plasmid (h) und REPS1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf REPS1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
REPS1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-409347-NIC | 20 µg | $410.00 |
REPS1 (RALBP1-assoziiertes Protein 1 mit Eps-Domäne) kodiert ein Adapterprotein, das durch Interaktionen mit RalBP1/RLIP76 und endozytischen Zubehörfaktoren an der clathrinvermittelten Endozytose und am Rezeptortransport beteiligt ist. Indem REPS1 die Signalgebung kleiner GTPasen mit der Vesikelbildung und der Internalisierung von Fracht koppelt, kann es nachgeschaltete Signalwege beeinflussen, die von einer regulierten Rezeptorverfügbarkeit abhängen, darunter Wachstumsfaktor- und Stressantwort-Signalwege. REPS1-assoziierte Prozesse überschneiden sich mit der Zytoskelettdynamik und dem Membranumbau und verbinden es damit mit Zellmigration, Adhäsion und Signalabschwächung. Eine Fehlregulation endozytischer Adapter und von Komponenten des Ral-Signalwegs wurde in der Krebsbiologie mit veränderter proliferativer Signalgebung und invasiven Phänotypen in Verbindung gebracht, was mechanistische Studien zur REPS1-Funktion in humanen Zellmodellen motiviert.
REPS1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des REPS1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von REPS1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die REPS1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit REPS1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.