RELA/NFκB p65 Plasmide Double Nickase (h): sc-400004-NIC

RELA codifica la subunità p65 di NFκB, un fattore di trascrizione centrale che forma eterodimeri (comunemente con NFKB1/p50) per regolare programmi genici inducibili che controllano l’infiammazione, le risposte immunitarie innate e adattative, la sopravvivenza cellulare e la segnalazione da stress. Nella segnalazione canonica di NFκB, stimoli a monte come TNF, IL-1 e l’attivazione dei recettori di riconoscimento dei pattern convergono sulla fosforilazione e degradazione di IκB mediata da IKK, consentendo la traslocazione nucleare di p65 e l’attivazione trascrizionale. L’attività di RELA è ulteriormente modulata da modificazioni post-traduzionali e dal cross-talk con le vie MAPK, JAK/STAT e dell’interferone, influenzando la produzione di citochine, la resistenza all’apoptosi e la differenziazione cellulare. Una segnalazione NFκB/RELA deregolata è spesso implicata in stati infiammatori cronici e in processi oncogenici, inclusi l’alterazione della segnalazione nel microambiente tumorale e l’attivazione di vie di sopravvivenza.

RELA/NFκB p65 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RELA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RELA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RELA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RELA interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.