RELA/NFκB p65 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422642-ACT

Rela codifica a subunidade p65 de RELA/NFκB, um regulador transcricional central da sinalização canônica de NF-κB que controla programas gênicos induzíveis envolvidos em inflamação, imunidade inata e adaptativa, sobrevivência celular e respostas ao estresse. Em células de camundongo, p65 forma dímeros funcionais, comumente com NFKB1/p50, e transloca-se para o núcleo após a degradação, mediada por IKK, dos inibidores IκB, integrando sinais de TNF, IL-1, TLRs, receptores de antígeno e vias de dano ao DNA. A transcrição dependente de RELA modula citocinas, quimiocinas, moléculas de adesão e fatores antiapoptóticos, moldando a ativação de macrófagos, a função de linfócitos e a homeostase tecidual. A atividade desregulada de NF-κB/RELA está associada a estados inflamatórios crônicos, autoimunidade e redes de sinalização oncogênicas, tornando Rela um alvo frequente em estudos mecanísticos de regulação imune e de transcrição adaptativa ao estresse.

RELA/NFκB p65 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Rela sem alterar a sequência de ADN subjacente.

RELA/NFκB p65 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Rela em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Rela, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de RELA/NFκB p65. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Rela nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de RELA/NFκB p65 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via RELA/NFκB p65 em células tumorais com expressão de Rela silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.