Reg IIIα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404278

Übersicht

REG3A kodiert das sekretierte Lektin Reg IIIα, ein antimikrobielles Protein der C‑Typ‑Lektin-Familie, das überwiegend von Epithelzellen im Gastrointestinaltrakt und an anderen mukosalen Oberflächen exprimiert wird. Reg IIIα bindet Kohlenhydrate der mikrobiellen Zellwand, unterstützt die angeborene Barriereabwehr und trägt während Entzündungen zur Homöostase zwischen Wirt und Mikrobiota bei. Seine Expression wird durch zytokingesteuerte epitheliale Programme reguliert, darunter IL‑22/STAT3‑Signalgebung und NF‑κB‑assoziierte Antworten, und wird häufig als Readout für mukosale Schädigung und Reparatur verwendet. Dysregulierte REG3A‑Spiegel wurden bei entzündlichen und metabolischen Erkrankungen berichtet, die Barrieregewebe betreffen, was REG3A für Studien zu epithelialen Stressantworten und mikrobengetriggerter Entzündung relevant macht.

Das Reg IIIα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des REG3A-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des REG3A-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von REG3A nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Reg IIIα-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von REG3A-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Reg IIIα-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf REG3A-Exone abzielen, die für die Reg IIIα-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere REG3A-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Reg IIIα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Reg IIIα CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des REG3A-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Reg IIIα HDR-Plasmid (h) und Reg IIIα HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von REG3A-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten REG3A-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.