Plásmido CRISPR de Activación (h) Reg IIIα: sc-404278-ACT

REG3A codifica la lectina tipo C secretada Reg IIIα, una proteína antimicrobiana expresada de forma destacada por las células epiteliales intestinales y pancreáticas, donde contribuye a la integridad de la barrera mucosa y a la defensa inmunitaria innata. Reg IIIα se une al peptidoglicano bacteriano y ayuda a moldear las interacciones huésped–microbioma, conectando las respuestas epiteliales al estrés con la eliminación microbiana. Su expresión está regulada por vías impulsadas por citocinas, como IL-22/STAT3, y con frecuencia se induce durante la inflamación y el daño tisular, favoreciendo programas de restitución y remodelación epitelial. La actividad desregulada de REG3A/Reg IIIα se ha asociado con la enfermedad inflamatoria intestinal, la pancreatitis y la inflamación relacionada con el cáncer colorrectal, lo que la convierte en un marcador útil y un nodo funcional en estudios de inmunidad epitelial.

Reg IIIα El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de REG3A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Reg IIIα El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus REG3A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional REG3A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Reg IIIα. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo REG3A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Reg IIIα en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Reg IIIα en células tumorales con expresión de REG3A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.