REEP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407088

概要

REEP1（receptor expression-enhancing protein 1）は小胞体（ER）に局在する膜タンパク質で、管状ERの構造形成を助け、膜輸送を支援します。神経細胞では、微小管関連プロセスとの相互作用を含む機能にも関与します。REEP1はERのダイナミクス、ER-ミトコンドリア間コミュニケーション、そして膜構造の組織化やオルガネラ分布が細胞恒常性と密接に連動する長い軸索の維持に寄与します。REEP1の機能異常は遺伝性の神経変性表現型と関連づけられており、とりわけ常染色体優性遺伝性痙性対麻痺（SPG31）との関連がよく知られています。軸索障害や運動ニューロンの脆弱性という観点から研究が進められています。実験モデルでは一般に、REEP1依存的なER形態変化、ミトコンドリア分布、ならびに小胞体ストレス応答（アンフォールドド・プロテイン・レスポンス）などのストレスシグナル経路が解析対象となります。

REEP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるREEP1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、REEP1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、REEP1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、REEP1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、REEP1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、REEP1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• REEP1の機能に不可欠なREEP1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、REEP1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• REEP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびREEP1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、REEP1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  REEP1 HDRプラスミド（h）および REEP1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはREEP1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のREEP1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。