Plásmido Doble Nickase (h) RecQL5: sc-406407-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)RecQL5 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa RecQL5 (h) y el plásmido de doble nickasa RecQL5 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a RECQL5. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: RecQL5 Anticuerpo (C-9): sc-515050
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) RecQL5 | sc-406407-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) RecQL5 | sc-406407-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RECQL5 codifica el miembro 5 de la familia de helicasas RecQ, una helicasa de ADN que ayuda a preservar la estabilidad del genoma al regular la dinámica de la replicación del ADN y coordinar la reparación de lesiones en el ADN. RecQL5 interactúa con la ARN polimerasa II y contribuye al control de la recombinación asociada a la transcripción, limitando eventos de entrecruzamiento anómalos y los conflictos entre replicación y transcripción. Por sus funciones en la regulación de la recombinación homóloga, el mantenimiento de las horquillas de replicación y las respuestas a la señalización del daño en el ADN, RECQL5 se estudia con frecuencia en vías que restringen la mutagénesis y los reordenamientos cromosómicos. La alteración de la función de RECQL5 se ha asociado con un aumento de fenotipos de inestabilidad genómica relevantes para la investigación mecanística sobre la susceptibilidad al cáncer y los trastornos del mantenimiento del genoma.
RecQL5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RECQL5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RECQL5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RECQL5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RECQL5 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.