Plásmido CRISPR de Activación (h) RBP2: sc-403940-ACT

KDM5A codifica RBP2, una desmetilasa de lisina de histonas que contiene un dominio JmjC y que elimina preferentemente las marcas H3K4me3/me2 para regular la actividad de los promotores y la producción transcripcional. Al moldear la accesibilidad de la cromatina y los programas de expresión génica dependientes de la ARN polimerasa II, RBP2 influye en la progresión del ciclo celular, la especificación de linaje y las respuestas a señales del desarrollo y del estrés. Su actividad se integra con redes de control epigenético que incluyen la regulación potenciador–promotor y la ocupación por factores de transcripción. La desregulación de la función de KDM5A/RBP2 se ha asociado con estados transcripcionales aberrantes observados en múltiples contextos relevantes para enfermedad, incluida la biología del cáncer y fenotipos del neurodesarrollo, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la regulación génica impulsada por la cromatina.

RBP2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KDM5A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RBP2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KDM5A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KDM5A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RBP2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KDM5A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RBP2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RBP2 en células tumorales con expresión de KDM5A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.