Plásmido CRISPR de Activación (h) RBM7: sc-408808-ACT

El RBM7 humano codifica una proteína de unión al ARN que actúa como componente central del complejo NEXT (Nuclear Exosome Targeting), asociándose con ZCCHC8 y SKIV2L2/MTR4 para canalizar ARN nucleares específicos hacia el exosoma de ARN, donde son procesados y degradados. RBM7 reconoce preferentemente elementos ricos en uridina (U) y contribuye a la vigilancia del ARN al favorecer la eliminación de transcritos aguas arriba de promotores, ARN de potenciadores (eRNAs) y otros ARN no codificantes de vida media corta, modulando así la salida transcripcional y manteniendo la homeostasis del ARN nuclear. Al acoplar el control de calidad del ARN con la transcripción y el metabolismo de ARN asociado a la cromatina, RBM7 influye en la estabilidad del genoma y en programas de expresión génica sensibles al estrés. La desregulación de las vías de degradación del ARN nuclear en las que participa RBM7 se ha asociado con cambios en redes reguladoras de genes y es relevante para estudios sobre la remodelación transcripcional vinculada al cáncer y fenotipos del neurodesarrollo relacionados con defectos en el procesamiento del ARN.

RBM7 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de RBM7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

RBM7 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus RBM7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional RBM7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de RBM7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo RBM7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de RBM7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía RBM7 en células tumorales con expresión de RBM7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.