RBM38 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403488-ACT

RBM38 (RNA-Bindungsmotiv-Protein 38) ist ein menschliches RNA-bindendes Protein, das die posttranskriptionelle Genregulation moduliert, indem es die Stabilität, Lokalisation und Translation von mRNA steuert. Es ist an der Kontrolle des Zellzyklus und an Stressreaktionsprogrammen beteiligt, indem es über sequenzspezifische Interaktionen mit Zieltranskripten in Signalwege eingreift, die mit Proliferation und Differenzierung verknüpft sind. Die Aktivität von RBM38 überschneidet sich mit Netzwerken der RNA-Prozessierung und kann p53-assoziierte Regulationskreise beeinflussen, indem es die Expression von Faktoren feinjustiert, die an Checkpoint-Antworten beteiligt sind. Eine Fehlregulation der RBM38-Expression wurde in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten beschrieben, was RBM38 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung RNA-zentrierter Mechanismen macht, die den zellulären Phänotyp beeinflussen.

RBM38 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen RBM38-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

RBM38 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des RBM38-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der RBM38-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen RBM38-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native RBM38-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von RBM38-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des RBM38-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem RBM38-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.