Plasmide CRISPR d'Activation (h) RBM25: sc-407825-ACT

Le gène humain **RBM25** code un régulateur d’épissage se liant à l’ARN, qui s’associe au spliceosome afin d’influencer le traitement alternatif des pré-ARNm, la sélection des exons et la maturation des ARNm. En contrôlant l’équilibre entre isoformes de transcrits, RBM25 contribue au contrôle qualité des ARN et à des programmes en aval affectant la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et l’expression génique adaptative au stress. Une activité dérégulée de RBM25 a été associée à des profils d’épissage aberrants et à une expression modifiée de transcrits liés à l’apoptose et à la signalisation, observées dans de multiples contextes pertinents pour les maladies, notamment en biologie du cancer. En tant que facteur d’épissage ayant un impact large sur le transcriptome, RBM25 est fréquemment étudié afin de cartographier des réseaux de régulation reliant le traitement des ARN à des issues phénotypiques.

RBM25 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RBM25 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RBM25 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RBM25 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RBM25, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RBM25. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RBM25 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RBM25 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RBM25 dans les cellules tumorales présentant une expression de RBM25 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.