RBM15 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-432890

Panoramica

Rbm15 codifica RBM15, una proteina legante l’RNA che partecipa alla regolazione genica post-trascrizionale, inclusi lo splicing alternativo, l’esportazione dell’mRNA e il controllo della stabilità. RBM15 è collegata alla regolazione epitranscrittomica attraverso interazioni con complessi associati agli enzimi “writer” di m6A, contribuendo a modellare le transizioni di stato cellulare e programmi di espressione genica specifici di linea. Nelle cellule murine, RBM15 è stata implicata in processi ematopoietici e di sviluppo in cui è necessario un processamento coordinato dell’RNA per differenziamento e proliferazione. La disregolazione delle reti di regolazione dell’RNA associate a RBM15 è studiata nel contesto della trasformazione oncogena e di fenotipi di differenziamento aberrante, a supporto di studi meccanicistici in biologia dell’RNA e modelli di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RBM15 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rbm15 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rbm15 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rbm15 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RBM15.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rbm15 per lo studio della segnalazione di RBM15, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rbm15 critici per la funzione di RBM15
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rbm15 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RBM15 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal RBM15 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rbm15. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RBM15 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR RBM15 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rbm15 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rbm15 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.