RASSF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401931

概要

RASSF1（Ras association domain family member 1）は、Ras関連のシグナルとHippoシグナル伝達および細胞骨格ダイナミクスを統合し、細胞周期の進行、アポトーシス、微小管の安定性を制御する足場タンパク質です。MST1/2や他の経路構成因子との相互作用を介して、RASSF1はアポトーシス促進および増殖抑制のプログラムを支え、接触阻害やゲノムの完全性に影響を与えます。この遺伝子は多様ながん種においてプロモーターの過剰メチル化によってエピジェネティックにサイレンシングされることが多く、がん生物学で頻繁に研究される腫瘍抑制遺伝子座の一つです。RASSF1活性の変化は、有糸分裂制御やストレス応答シグナルの破綻とも関連しており、その下流では増殖や細胞生存の表現型に影響が及びます。

RASSF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRASSF1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RASSF1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RASSF1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RASSF1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RASSF1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RASSF1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RASSF1の機能に不可欠なRASSF1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RASSF1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RASSF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRASSF1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RASSF1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RASSF1 HDRプラスミド（h）および RASSF1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRASSF1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRASSF1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。