Plasmide Double Nickase (h) Raptor: sc-400960-NIC

RPTOR code pour Raptor, une sous-unité d’échafaudage essentielle du complexe mTOR 1 (mTORC1) qui recrute les substrats et coordonne les signaux liés aux nutriments, aux facteurs de croissance et à l’état énergétique afin de réguler la synthèse protéique, l’autophagie, la biogenèse des ribosomes et le métabolisme lipidique. En phosphorylant des effecteurs en aval tels que S6K et 4E‑BP1, l’activité de mTORC1 dépendante de Raptor façonne les programmes de croissance et de prolifération cellulaires et intègre la signalisation lysosomale au contrôle anabolique. Une dérégulation de la signalisation mTORC1/Raptor a été impliquée dans des cancers, des troubles métaboliques et des phénotypes neurodéveloppementaux, où des altérations du contrôle traductionnel et de l’autophagie contribuent à des états cellulaires associés à la maladie. En tant que nœud central de l’axe PI3K–AKT–mTOR et des voies de détection des acides aminés, Raptor est largement étudié dans les réponses au stress, l’homéostasie mitochondriale et lysosomale, ainsi que les interactions entre voies de signalisation.

Raptor Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus RPTOR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de RPTOR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de RPTOR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de RPTOR.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.