Rak Double Nickaseプラスミド (h): sc-405590-NIC

ヒトFRKは、受容体型ではないチロシンキナーゼRakをコードしている。RakはSrcファミリーに関連する酵素で、上皮系の細胞環境で高発現し、増殖因子受容体や細胞間接着複合体からのシグナル伝達を調節する。Rakはリン酸化依存的な機構を通じて、細胞骨格ダイナミクス、細胞周期の進行、分化プログラムの制御に関与し、EGFR/ErbBシグナル、フォーカルアドヒージョン（接着斑）シグナル、接着結合部位の制御と交差する経路に組み込まれている。FRKの活性や発現の変化は、増殖制御の破綻や上皮恒常性の異常と関連づけられており、腫瘍生物学、浸潤、系統（ラインエージ）特異的シグナル伝達の研究において重要である。増殖や細胞運動に対して文脈依存的な作用を示すキナーゼとして、Rakはストレス応答および受容体駆動型シグナルにおけるリン酸化ネットワークやフィードバック制御を解明する目的で、しばしば研究対象となっている。

Rak ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FRK 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FRK内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FRKの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FRKが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。