Rag A CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (h): sc-411501

개요

RRAGA는 라소(Ras) 관련 소형 GTPase인 Rag A를 암호화하며, RagC/D와 이종이량체(heterodimer)를 형성해 세포 내 아미노산 가용성을 리소좀 표면에서의 mTORC1 활성화와 연결한다. Rag A는 GDP 결합 상태와 GTP 결합 상태 사이를 조절적으로 순환하고 Ragulator 복합체 및 GATOR 조절인자들과 상호작용함으로써 mTORC1 기질의 인산화를 제어하며, 단백질 합성, 자가포식 억제, 대사 재프로그래밍을 조정한다. Rag GTPase 신호전달의 이상 조절과 비정상적인 mTORC1 활성은 암 생물학뿐 아니라 대사 및 신경발달 질환 맥락에서도 관여하는 것으로 알려져 있어, RRAGA는 영양분 감지 회로를 분석하는 데 유용한 핵심 노드가 된다. RRAGA를 유전적으로 교란하면 리소좀 의존적 신호전달과 그 하위의 번역 및 자가포식 경로에 대한 기전 연구가 가능하다.

Rag A CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h)는 human 세포주에서 RRAGA 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 RRAGA 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 RRAGA의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 Rag A 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 Rag A 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 RRAGA 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• Rag A 기능에 중요한 RRAGA 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 RRAGA 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• Rag A CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h) 및 Rag A CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 RRAGA 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  Rag A HDR 플라스미드 (h) 및 Rag A HDR 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 RRAGA 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 RRAGA 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.