Rab11-FIP5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-407779-ACT

RAB11FIP5は、Rab11ファミリー相互作用タンパク質であるRab11-FIP5をコードしており、Rab11依存性のリサイクリングエンドソーム輸送においてエフェクターとして機能する。Rab11-FIP5は、小胞のソーティングや膜リサイクリング過程を協調的に制御し、受容体のターンオーバー、エンドサイトーシス、極性輸送に影響を与えることで、細胞膜におけるシグナル出力を形成する。さらに、エンドソーム動態およびカーゴのリサイクリングにおける役割を通じて、細胞移動、接着、ならびに細胞骨格の組織化の制御にも寄与する。Rab11エフェクターが関与するリサイクリング経路の破綻は、複数の疾患関連モデルで観察されるシグナル異常や浸潤性表現型と関連づけられており、本遺伝子は輸送依存的メカニズムの研究において有用であることが示唆される。

Rab11-FIP5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RAB11FIP5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rab11-FIP5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RAB11FIP5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRAB11FIP5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rab11-FIP5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRAB11FIP5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRab11-FIP5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRAB11FIP5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRab11-FIP5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。