Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Rab 9A Double Nickase Plasmid (h): sc-416915-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Rab 9A Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Rab 9A Double-Nickase-Plasmid (h) und Rab 9A Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RAB9A abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Rab 9A: sc-53145
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Rab 9A Double Nickase Plasmid (h) | sc-416915-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rab 9A Double Nickase Plasmid (h2) | sc-416915-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAB9A kodiert die kleine GTPase Rab9A, einen zentralen Regulator des Transports in späten Endosomen, der die Sortierung von Fracht sowie den Transport zwischen Endosomen und dem Trans-Golgi-Netzwerk unterstützt. Durch den Wechsel zwischen GDP- und GTP-gebundenen Zuständen koordiniert Rab9A Vesikelabschnürung, -bewegung und -Andockereignisse, die für Rezeptorrecycling, lysosomenbezogene Signalwege und die Aufrechterhaltung der Membranhomöostase wichtig sind. Eine veränderte Rab9A-Aktivität wurde mit einer Fehlregulation des endolysosomalen Transports und autophagienahen Prozessen in Verbindung gebracht, die häufig in der Biologie neurodegenerativer und infektiöser Erkrankungen sowie beim krebsassoziierten Umbau des intrazellulären Traffickings eine Rolle spielen. Diese Funktionen machen RAB9A zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien des vesikulären Transports, der Kommunikation zwischen Organellen und der Proteostase.
Rab 9A Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RAB9A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RAB9A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RAB9A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RAB9A-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.