Plasmide CRISPR d'Activation (h) Rab 5C: sc-403247-ACT

Le gène humain RAB5C code Rab5C, une petite GTPase qui régule la fusion des endosomes précoces, l’endocytose médiée par les récepteurs et la dynamique du trafic endosomal, lesquels façonnent le recyclage membranaire et la durée de la signalisation. En alternant entre les états liés au GDP et au GTP, Rab5C coordonne le recrutement d’effecteurs impliqués dans l’amarrage des vésicules, le tri des cargos et le remodelage des phosphoinositides, influençant des voies telles que le renouvellement des récepteurs aux facteurs de croissance et l’absorption des nutriments. L’activité de la famille Rab5 s’interface avec le transport cytosquelettique et l’acheminement des endosomes vers les lysosomes, affectant des processus comme la prolifération, la polarité et les réponses aux signaux extracellulaires. Un trafic endocytique dérégulé et une signalisation dépendante de Rab5 ont été associés à l’hyperactivation de récepteurs liée au cancer, à des mécanismes neurodégénératifs liés à des déficits de transport vésiculaire, ainsi qu’à la biologie des infections où des agents pathogènes exploitent les voies d’entrée endosomales de l’hôte.

Rab 5C Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RAB5C sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Rab 5C Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RAB5C dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RAB5C, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Rab 5C. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RAB5C natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Rab 5C au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Rab 5C dans les cellules tumorales présentant une expression de RAB5C silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.