Rab 44 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-418677-ACT

RAB44はRab 44をコードしており、Rabファミリーに属する大型の低分子GTPアーゼです。Rab 44は小胞輸送や膜動態に関与し、細胞内輸送、エンドリソソーム系の構造・機能の維持、ならびに調節性分泌を協調的に制御します。GTP結合型とGDP結合型の間を循環する分子スイッチとして、Rab 44はRab依存的なテザリング／膜融合装置と連携し、区画の成熟やシグナル出力の形成に関与すると考えられます。RAB44の発現パターンの変化は免疫関連の状況やがんのトランスクリプトームで報告されており、疾患に関連する細胞状態における小胞輸送プログラムの破綻を研究するためのマーカー、ならびに機能的ハブとしての有用性が示唆されています。Rab 44の活性を解析することで、小胞輸送が受容体リサイクリング、炎症性シグナル伝達、細胞ストレス応答にどのように影響するかを明らかにする手がかりになります。

Rab 44 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RAB44の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rab 44 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RAB44 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRAB44転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rab 44の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRAB44遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRab 44依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRAB44発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRab 44経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。