Rab 11B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402256-ACT

RAB11Bは、小型GTPアーゼであるRab11Bをコードしており、リサイクリングエンドソーム動態の主要な制御因子です。Rab11Bは、エンドソームから形質膜への戻り輸送や、トランス・ゴルジネットワーク（TGN）を介する膜輸送を協調的に制御します。GDP結合型とGTP結合型の間を循環することで、Rab11Bは小胞の出芽、輸送、融合といった過程を制御し、受容体リサイクリング、インテグリンのターンオーバー、極性をもったカーゴ輸送の成立に関与します。Rab11ファミリーのシグナル伝達は、エフェクターとの相互作用を介してアクチン構造や膜組成に影響を与え、細胞骨格リモデリングや細胞移動プログラムとも交差します。RAB11B活性に関連するエンドサイトーシス・リサイクリングおよび小胞輸送の破綻は、シグナル恒常性の変化と結びつき、がん細胞の浸潤、神経生物学、ならびにより広範な輸送異常関連疾患の機序に関わる表現型との関連が示唆されています。

Rab 11B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RAB11Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rab 11B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RAB11B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRAB11B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rab 11Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRAB11B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRab 11B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRAB11B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRab 11B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。