Rab 11A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400617-ACT

RAB11Aは、小型GTPアーゼであるRab11Aをコードしており、リサイクリングエンドソームの動態を制御する中心的な調節因子として、小胞の出芽、輸送、ならびに細胞膜への係留を協調的に統括します。Rab11Aは、Rab11ファミリー相互作用タンパク質（FIP）と結合し、アクチンおよび微小管ベースのモーターと連携することで、極性を伴う膜輸送、受容体リサイクリング、細胞質分裂、上皮ルーメン形成を制御します。これらのトラフィッキング機能を介して、Rab11Aは細胞表面受容体やインテグリンからのシグナル出力に影響し、細胞移動や極性を形作るエンドサイトーシス後のソーティング選択にも寄与します。Rab11A依存的なリサイクリングの破綻は、膜輸送や区画化が乱れる状況において、がん化に関連する表現型、神経変性過程、ならびに宿主—病原体相互作用と関連づけられています。

Rab 11A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RAB11Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rab 11A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RAB11A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRAB11A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rab 11Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRAB11A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRab 11A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRAB11A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRab 11A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。