PYGB CRISPR Activationプラスミド (h): sc-406294-ACT

ヒトPYGBは、グリコーゲンを分解してグルコース-1-リン酸を産生し、細胞のエネルギー供給を維持する反応を触媒する律速酵素であるグリコーゲンホスホリラーゼの脳型アイソフォームをコードします。PYGBは、グリコーゲン動員を解糖系およびより広範な糖質代謝と結び付けることで、栄養や酸素の利用可能性が変動する状況下でも代謝の柔軟性を支えます。さらにPYGB活性は、AMP/ATPセンシングや細胞生存・増殖に影響するストレス応答経路など、エネルギー恒常性を調節するシグナル伝達ネットワークとも交差します。グリコーゲン代謝の破綻やPYGB発現の変化は、代謝適応やがんに伴うエネルギー利用の再配線といった文脈で観察されており、バイオエネルゲティクスの機構研究における有用な標的となっています。

PYGB CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PYGBの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PYGB CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PYGB 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPYGB転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PYGBの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPYGB遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPYGB依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPYGB発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPYGB経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。