PTPσ CRISPR 활성화 플라스미드(m): sc-422531-ACT

마우스 Ptprs는 단백질 티로신 포스파타아제 시그마(PTPσ)를 암호화하는 유전자로, 신경 및 상피 환경에서 풍부하게 발현되는 수용체형 포스파타아제입니다. PTPσ는 세포외기질(ECM)로부터의 신호를 세포 내 탈인산화 사건과 통합하여 세포 부착, 신경돌기(neurite) 신장, 축삭 유도(axon guidance), 시냅스 조직화를 조절합니다. PTPσ는 헤파란 황산 및 콘드로이틴 황산 프로테오글리칸과 상호작용하여, 세포 주변(pericellular) 기질을 세포골격 재구성과 성장원추(growth cone) 행동 및 회로 가소성(circuit plasticity)에 영향을 미치는 신호 모듈에 연결합니다. 인산화 의존적 경로의 조절을 통해 Ptprs는 접촉 의존적 신호전달과 조직 패터닝에 기여하며, 문헌에서는 PTPσ 활성의 변화가 신경발달 관련 표현형, 재생(regeneration) 저하, 세포–세포 간 소통 이상과 연관되는 것으로 보고되어 왔습니다. 이러한 특성 때문에 Ptprs는 신경 연결성과 미세환경 조절에서 포스파타아제에 의해 제어되는 신호전달의 기전을 연구하는 데 유용한 표적입니다.

PTPσ CRISPR 활성화 플라스미드(m)는 기본 DNA 서열을 변경하지 않고 내인성 Ptprs 발현을 상향 조절하는 표적화된 비파괴적 접근법을 제공합니다.

PTPσ CRISPR 활성화 플라스미드(m)는 인간 세포주에서 Ptprs 유전자좌의 고효율, 위치 특이적 전사 상향 조절을 위해 설계된 3개의 플라스미드로 구성된 시너지 활성화 매개체(SAM) 시스템입니다. 이 시스템은 DNA 결합 능력은 유지하면서 뉴클레아제 활성을 제거하는 두 가지 비활성화 돌연변이(D10A 및 N863A)를 지닌 촉매 활성 없는 Cas9(dCas9)을 중심으로 구축되었습니다. 이 dCas9은 강력한 전사 활성화제인 VP64와 융합되어 있으며, 선별을 위해 블라스티시딘 내성 유전자와 함께 발현됩니다. 두 번째 플라스미드는 dCas9-VP64와 협동하여 작용하는 2차 활성화 복합체인 MS2-p65-HSF1 융합 단백질을 암호화하며, 히그로마이신 내성 유전자와 함께 존재한다. 세 번째 플라스미드는 표적 특이적 20nt sgRNA를 암호화하며, 이는 MS2-p65-HSF1 복합체를 활성화 부위로 유인하는 두 개의 MS2 RNA 아파타머와 융합되어 있으며, 푸로마이신 내성 유전자가 함께 포함되어 있습니다. 세 플라스미드는 모든 시스템 구성 요소의 균형 잡힌 발현을 위해 질량비 1:1:1로 전달됩니다.

표적 부위에 조립되면 SAM 복합체는 Ptprs 전사 시작점의 상류 약 200bp 지점에 결합하며, 이곳에서 VP64, p65 및 HSF1이 협력하여 전사 기구를 모집하고 내인성 PTPσ 발현의 상향 조절을 유도합니다. 핵산분해 활성을 가진 Cas9과 달리, dCas9은 이중 가닥 절단을 유발하거나 게놈 서열을 변형시키지 않아, 원형 Ptprs 위치를 보존하고 내인성 위치에서 PTPσ 의존적 전사 반응을 연구할 수 있게 하여, 기능 연구, 표적 유전자 식별 및 Ptprs 발현이 침묵되거나 감소된 종양 세포에서 PTPσ 경로 복원을 모델링하는 데 유용한 도구입니다.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.