Plasmide CRISPR/Cas9 KO PTN (m2): sc-422498-KO-2

Présentation

Ptn code la pléiotrophine (PTN), un facteur de croissance sécrété se liant à l’héparine, qui module la communication cellule–cellule et cellule–matrice au cours du développement et du remodelage tissulaire. PTN transmet des signaux via des interactions avec des phosphatases protéiques à tyrosine de type récepteur et d’autres partenaires de surface, influençant des cascades de phosphorylation, la croissance des neurites, la migration cellulaire et des programmes de survie, notamment des processus liés aux voies MAPK/ERK et PI3K/AKT. Dans des modèles murins, PTN est impliquée dans la mise en place des patrons neurodéveloppementaux, les réponses angiogéniques et la régulation des microenvironnements inflammatoires, avec des modifications d’expression rapportées dans divers contextes de lésion et de signalisation proliférative. Ces fonctions font de Ptn un nœud utile pour disséquer les signaux extracellulaires des facteurs de croissance qui façonnent le comportement des lignages, la connectivité synaptique et le dialogue entre stroma et système immunitaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PTN (m2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ptn dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ptn, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ptn à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PTN.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ptn pour l'étude de la signalisation de PTN, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ptn essentiels à la fonction de PTN
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ptn pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PTN plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PTN plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ptn. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PTN plasmide HDR (m) et le PTN (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ptn pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ptn définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.