PSPC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401728-ACT

PSPC1 (componente 1 dos paraspeckles) é uma proteína de ligação a RNA e um elemento estrutural central dos paraspeckles nucleares, que coordena a regulação gênica transcricional e pós-transcricional. Por meio de interações com RNAs longos não codificadores, como o NEAT1, e com outros membros da família DBHS, a PSPC1 ajuda a organizar complexos ribonucleoproteicos que influenciam o processamento de RNA, a retenção nuclear e programas de expressão gênica responsivos ao estresse. A atividade da PSPC1 se cruza com vias de regulação da cromatina e de metabolismo de RNA que moldam transições de estado celular e respostas adaptativas. A biologia dos paraspeckles desregulada e a expressão alterada de PSPC1 têm sido associadas a fenótipos relevantes para o câncer e a outras condições em que redes regulatórias de RNA estão perturbadas, tornando-a um alvo útil para estudos mecanísticos.

PSPC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PSPC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PSPC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PSPC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PSPC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PSPC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PSPC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PSPC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PSPC1 em células tumorais com expressão de PSPC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.