PSMC4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403885-ACT

PSMC4 codifica uma subunidade AAA+ ATPase da partícula reguladora 19S do proteassoma 26S, contribuindo para o reconhecimento, o desenovelamento e a translocação de substratos poliubiquitinados para o núcleo catalítico. Por meio dessa função no sistema ubiquitina–proteassoma, o PSMC4 contribui para a proteostase, para a degradação de reguladores do ciclo celular, para a modulação de respostas ao estresse e para o controle de programas transcricionais influenciados pela estabilidade proteica. A atividade do proteassoma interage com vias como a sinalização de NF-κB, as respostas a danos no DNA e as respostas adaptativas ao estresse proteotóxico, tornando o PSMC4 relevante para estudos de proliferação e homeostase celular. A desregulação do proteassoma e a alteração da expressão de suas subunidades têm sido associadas a estados oncogênicos e a defeitos de proteostase relacionados à neurodegeneração, o que sustenta a investigação de PSMC4 em modelos celulares relevantes para doenças.

PSMC4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PSMC4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PSMC4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PSMC4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PSMC4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PSMC4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PSMC4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PSMC4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PSMC4 em células tumorais com expressão de PSMC4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.