PSF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-427964

Übersicht

Sfpq kodiert den Spleißfaktor PSF (prolin- und glutaminreiches Protein), einen multifunktionalen RNA- und DNA-bindenden Regulator, der durch Wechselwirkungen mit langen nichtkodierenden RNAs wie NEAT1 die prä-mRNA‑Spleißung, die transkriptionelle Kontrolle und die Biologie nukleärer Paraspeckles koordiniert. In Mauszellen trägt PSF zur Genauigkeit der RNA‑Prozessierung, zu Entscheidungen beim alternativen Spleißen und zur Kopplung von Transkription und RNA‑Reifung bei und ist zudem an Prozessen der Genomstabilität beteiligt, die mit DNA‑Schadensantworten verknüpft sind. Über diese Aktivitäten beeinflusst Sfpq breit angelegte Genexpressionsprogramme, die die Zellzykluskontrolle, neuronale Differenzierung und stressadaptive Signalwege betreffen. Eine dysregulierte SFPQ/PSF‑Funktion und Fehl-Lokalisierung wurden mit veränderter RNA‑Metabolik und für Neurodegeneration relevanten Phänotypen in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien von Netzwerken RNA‑bindender Proteine macht.

Das PSF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Sfpq-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Sfpq-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Sfpq nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PSF-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Sfpq-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PSF-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Sfpq-Exone abzielen, die für die PSF-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Sfpq-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PSF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PSF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Sfpq-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PSF HDR-Plasmid (m) und PSF HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Sfpq-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Sfpq-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.