PRX2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422788-ACT

O gene **Prrx2** de camundongo codifica o **PRX2**, um fator de transcrição homeobox relacionado a paired que regula programas gênicos que controlam a identidade mesenquimal, a especificação do destino celular e o padrão de organização dos tecidos durante o desenvolvimento. O PRX2 participa de redes transcricionais que coordenam processos associados à transição epitélio–mesênquima (EMT), à remodelação da matriz extracelular e ao comportamento migratório, com efeitos a jusante sobre a diferenciação e respostas estromais associadas a feridas. A atividade desregulada de PRRX2 tem sido relacionada na literatura a alterações no comprometimento de linhagem e a fenótipos invasivos em contextos relevantes para doenças, tornando-o um nó útil para estudar a plasticidade transcricional. Como uma proteína nuclear ligante de DNA, o PRX2 é frequentemente investigado quanto à forma como integra sinais do desenvolvimento ao controle transcricional dependente do estado da cromatina.

PRX2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Prrx2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PRX2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Prrx2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Prrx2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PRX2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Prrx2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PRX2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PRX2 em células tumorais com expressão de Prrx2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.