PRX VI Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401549-ACT

O PRDX6 codifica a peroxirredoxina VI (PRX VI), uma enzima antioxidante bifuncional com atividade de glutationa peroxidase e atividade de fosfolipase A2 independente de cálcio, que contribui para a desintoxicação do peróxido de hidrogênio e para o reparo de fosfolipídios de membrana oxidados. Ao regular o equilíbrio redox e a renovação de fosfolipídios, a PRX VI influencia as respostas celulares ao estresse oxidativo, à peroxidação lipídica e à sinalização inflamatória, intersectando-se com vias que modulam a apoptose, a proteostase e a função mitocondrial. Alterações na expressão de PRDX6 e na atividade da PRX VI têm sido associadas à desregulação redox na biologia do câncer, a distúrbios metabólicos e cardiovasculares e a processos neurodegenerativos, nos quais a lesão oxidativa e o dano de membrana são características marcantes.

PRX VI O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRDX6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PRX VI O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRDX6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRDX6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PRX VI. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRDX6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PRX VI no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PRX VI em células tumorais com expressão de PRDX6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.