Plasmide CRISPR d'Activation (h) PRX V: sc-402681-ACT

La peroxyrédoxine 5 (PRDX5 ; PRX V) est une peroxydase dépendante de la thiorédoxine qui détoxifie le peroxyde d’hydrogène et les hydroperoxydes organiques, contribuant au maintien de l’homéostasie rédox cellulaire au niveau des mitochondries, des peroxysomes et du cytosol. En limitant les dommages oxydatifs aux lipides, aux protéines et à l’ADN, PRX V influence la fonction mitochondriale, la signalisation adaptative au stress et les voies sensibles au statut rédox qui façonnent l’inflammation et la survie cellulaire. Des altérations de l’expression ou de l’activité de PRDX5 ont été associées à des phénotypes de stress oxydant observés dans la neurodégénérescence, les dysfonctions métaboliques, des modèles de lésions cardiovasculaires et la biologie tumorale, où les espèces réactives de l’oxygène modulent la prolifération et l’apoptose. En tant que régulateur rédox, PRDX5 est fréquemment étudiée pour son rôle dans le contrôle des seuils d’espèces réactives de l’oxygène qui influencent les réponses immunitaires innées et l’intégrité mitochondriale.

PRX V Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PRDX5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PRX V Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PRDX5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PRDX5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PRX V. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PRDX5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PRX V au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PRX V dans les cellules tumorales présentant une expression de PRDX5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.