PRPS2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404095-ACT

PRPS2 codifica a fosforribosil pirofosfato sintetase 2, uma enzima citosólica que produz fosforribosil pirofosfato (PRPP), um substrato essencial para a biossíntese de nucleotídeos tanto de novo quanto por via de salvamento. Ao controlar a disponibilidade de PRPP, a PRPS2 ajuda a regular a produção de purinas e pirimidinas, sustentando a síntese de DNA/RNA e o fluxo metabólico por programas biossintéticos ligados ao fosfato de ribose e ao metabolismo de um carbono. A atividade da PRPS2 está intimamente ligada à capacidade proliferativa e às respostas celulares a sinais de nutrientes e de estresse, influenciando a homeostase de nucleotídeos, a dinâmica de replicação e a produção transcricional. A desregulação do metabolismo de nucleotídeos dependente de PRPS2 tem sido associada a contextos de doenças proliferativas e metabólicas, tornando-a um nó útil para estudos mecanísticos de reconfiguração de vias.

PRPS2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRPS2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PRPS2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRPS2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRPS2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PRPS2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRPS2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PRPS2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PRPS2 em células tumorais com expressão de PRPS2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.