PRP4 kinase Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h2): sc-411224-LAC-2

O PRPF4B humano codifica a quinase PRP4, uma proteína quinase de serina/treonina que se associa ao tri-snRNP U4/U6·U5 e regula o splicing do pré-mRNA ao fosforilar componentes do spliceossoma, sustentando a montagem do spliceossoma e sua ativação catalítica. Por meio do controle da seleção de sítios de splicing e da maturação de transcritos, a quinase PRP4 conecta o processamento nuclear de RNA à progressão do ciclo celular e a programas de sinalização responsivos ao estresse que dependem de expressão gênica coordenada. A desregulação da expressão ou da atividade de PRPF4B tem sido associada a padrões de splicing aberrantes observados no câncer e em outros distúrbios com processamento de RNA alterado, tornando-o relevante para estudos de remodelamento do transcriptoma e da diversidade do proteoma. A edição gênica de PRPF4B em células humanas permite a investigação mecanística da dinâmica do spliceossoma, da fosforregulação de fatores de splicing e dos impactos subsequentes sobre o splicing alternativo, as respostas a danos no DNA e os fenótipos celulares em fluxos de trabalho de genômica funcional.

As Partículas de Ativação Lentivirais PRP4 kinase (h2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de PRPF4B numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais PRP4 kinase (h2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição PRPF4B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de PRP4 kinase. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo PRPF4B e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.