Plásmido Doble Nickase (h) Prothrombin: sc-400962-NIC

F2 codifica la protrombina humana, un cimógeno dependiente de la vitamina K que se convierte por proteólisis en trombina para impulsar las etapas centrales de la cascada de coagulación. La trombina escinde el fibrinógeno para formar fibrina, amplifica la formación del coágulo mediante la activación de los factores V, VIII, XI y XIII, y señaliza a través de receptores activados por proteasas para coordinar la activación plaquetaria y las respuestas inflamatorias vasculares. La producción y maduración de la protrombina dependen del procesamiento secretor hepático y de la γ-carboxilación, lo que vincula la regulación de F2 con el estado nutricional y el control de calidad del retículo endoplásmico. La actividad desregulada de F2 y la variación genética se estudian ampliamente en el contexto de la trombosis y el desequilibrio hemostático, lo que proporciona un punto de entrada mecanístico para analizar la dinámica de la vía de coagulación en modelos celulares e in vivo.

Prothrombin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus F2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de F2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de F2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con F2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.