Plásmido CRISPR de Activación (h) Prothrombin: sc-400962-ACT

F2 codifica la protrombina, un zimógeno dependiente de la vitamina K que se convierte por proteólisis en trombina, una serinproteasa central en la cascada de coagulación. La trombina escinde el fibrinógeno para formar fibrina, amplifica la coagulación mediante la activación de los factores V, VIII, XI y XIII, y acopla la hemostasia a respuestas celulares a través de la señalización de los receptores activados por proteasas (PAR) en plaquetas y células vasculares. La regulación de la activación de la protrombina se entrecruza con vías anticoagulantes, incluidas la antitrombina y el sistema de la proteína C, modulando la cinética de generación de trombina y la estabilidad del coágulo. La desregulación de la expresión o actividad de F2 se asocia con desequilibrio de la coagulación y fenotipos trombóticos, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico para estudiar la hemostasia y la biología vascular asociada a la inflamación.

Prothrombin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de F2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Prothrombin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus F2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional F2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Prothrombin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo F2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Prothrombin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Prothrombin en células tumorales con expresión de F2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.