PRMT7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-431946

Übersicht

Prmt7 kodiert PRMT7, eine Protein-Arginin-Methyltransferase des Typs III, die die symmetrische Dimethylierung von Argininresten an Histon- und Nicht-Histon-Substraten katalysiert und dadurch Chromatinorganisation und Transkriptionsprogramme mitprägt. Die PRMT7-Aktivität greift in epigenetische Regulation, RNA-Prozessierung und stressadaptive Signalwege ein und beeinflusst so die Linienfestlegung sowie die Aufrechterhaltung der zellulären Identität in Säugersystemen. In Mausmodellen wurde Prmt7 mit der Regulation der Funktion von Muskelstammzellen, der neuronalen Entwicklung und immunbezogenen Transkriptionsantworten in Verbindung gebracht – über die Modulation der Chromatinzugänglichkeit und von Genexpressionsnetzwerken. Eine fehlregulierte PRMT7-abhängige Methylierung wurde mit veränderten Differenzierungszuständen und Phänotypen assoziiert, die für entwicklungs- und stoffwechselbedingte Erkrankungen relevant sind, was PRMT7 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien der epigenetischen Kontrolle macht.

Das PRMT7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Prmt7-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Prmt7-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Prmt7 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PRMT7-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Prmt7-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PRMT7-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Prmt7-Exone abzielen, die für die PRMT7-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Prmt7-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PRMT7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PRMT7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Prmt7-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PRMT7 HDR-Plasmid (m) und PRMT7 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Prmt7-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Prmt7-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.