PRL-R Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400814-LAC

O PRLR codifica o recetor de prolactina (PRL-R), um recetor de citocinas de classe I que se liga à prolactina para regular a diferenciação epitelial, a sinalização lactogénica e a homeostase dos tecidos em múltiplos órgãos. A dimerização do recetor induzida pelo ligando ativa a via JAK2/STAT5, bem como as vias PI3K/AKT e MAPK/ERK, coordenando programas transcricionais ligados à proliferação, à sobrevivência e à expressão de genes responsivos a hormonas. A sinalização do PRLR é amplamente estudada no contexto da regulação endócrina e da modulação imunitária, e a desregulação da atividade da via PRL-R tem sido associada a alterações no controlo do crescimento e a fenótipos oncogénicos em tecidos responsivos a hormonas. Como resultado, o PRLR é frequentemente investigado como um nó que liga a sinalização de recetores de citocinas a resultados transcricionais dependentes do contexto e a comportamentos celulares relevantes para a doença.

As Partículas de Ativação Lentivirais PRL-R (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de PRLR numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais PRL-R (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição PRLR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de PRL-R. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo PRLR e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.